1. 将之前配好的胶固定在电泳装置上，加入1X电泳液（如图）。

2. 拔出梳子（如图），应该两侧同时用力，缓慢拔出，注意在拔除梳子时防止气泡进入梳孔使其变形，若上样孔有变形，可用适当粗细的针头拨正。

3.加入蛋白样品，一般10孔的梳孔，每孔可以加入20ul - 40ul蛋白样品，15孔的梳孔，每孔可以加入10ul - 30ul蛋白样品(如图)，是用微量注射器加样，平时我们也可以用普通的移液枪加样，尽量让枪头深入梳孔底物，防止蛋白样品飘出，一般在目的蛋白两侧加入等量的marker，如果两侧有空的梳孔，应该加入1X的loading buffer，起“压边”作用，可以使蛋白样品在一条水平线上往下跑。

4.电泳：接上电极(如图)，正负极不要弄反，红色对红色，黑色对黑色，初始电压设为90V，当样品跑至分离胶时将电压调至120V，一般在溴酚蓝跑出胶时停止电泳，也可根据目的蛋白的分子量来选择跑的时间，如分子量较大，可以延长电泳时间，使得分子量大的marker跑的分散开，容易判断分子量。

注意事项

1.蛋白样品上样量最好相等，不要过多。

2.不要过多重复使用电泳Buffer

3.最佳分辨区在分离胶的2/3

4.电泳后测定的分子量有10%的误差，不可完全信任。有些蛋白质由亚基（如血红蛋白）或两条以上的肽链（α-胰凝乳蛋白酶）组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链，SDS-PAGE电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量，有的蛋白质（如电荷异常或结构异常的蛋白质，带有较大辅基的蛋白质）不能采用该发测相对分子量。

5.如果电泳中出现拖尾，染色带的背景不清晰等现象，可能是SDS不纯引起。

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